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傷口愈合實驗--神經生長因子（NGF）和神經生長因子前體（proNGF）會激活乳腺癌干細胞侵襲
2016-05-26 11:16:21 來源：
Nerve Growth Factor and proNGF Simultaneously Promote Symmetric Self-Renewal, Quiescence, and Epithelial to Mesenchymal Transition to Enlarge the Breast Cancer Stem Cell Compartment
E. Tomellini, Y. Touil, C. Lagadec, S. Julien, P. Ostyn, N. Ziental-Gelus, S. Meignan, J. Lengrand, E. Adriaenssens, R. Polakowska and X. Le Bourhis
STEM CELLS, 2015, 10.1002/stem.1849
在文中，使用Ibidi開發的傷口愈合插件進行了傷口愈合實驗。這是一種雙孔的硅膠插件，可以放在培養皿中，插件兩孔間的孔壁寬度為500μm。將細胞種在插件中，等待細胞貼壁長滿后，將插件移除，這樣，兩孔間的縫隙就是一個無細胞的“劃痕”。
- 實驗材料
- 細胞: MCF-7 、腫瘤分離細胞
- 實驗耗材: 傷口愈合插件培養皿 (ibidi, 81176)
- 細胞培養基: MEM medium
- 試劑: EGF （sigma， E9644）
NGF （Scil Protein）
proNGF （Alomone Labs，N-285）
- 滅菌鑷子
- 實驗步驟
- 鋪細胞（圖三）
- 將ibidi傷口愈合培養皿底部的保護膠帶撕除。
- 在ibidi細胞插件的每孔中加入1 × 104的細胞懸液。注意不要大力晃動培養皿。以防止細胞不均勻。
- 在37。C培養箱中孵育24小時。
圖三：A. 去除培養皿底部的保護膠帶。B.C.在ibidi傷口愈合插件中加入細胞。
- 形成“劃痕”
- 采用無血清MEM培養基培養細胞4小時
- 如圖四所示，小心的用鑷子夾住插件的一個角，將插件移除。
- 移除插件后，要用顯微鏡檢查是否形成合格的“劃痕”。
- 小心的清洗細胞，之后加入2ml培養基進行培養（圖五）。
- 采集并分析圖像
- 在顯微鏡下選取能同時看到“劃痕”和兩邊細胞的視野進行成像，“劃痕”的方向*好是水平或者垂直。
- 采集0h和4h的圖像，并且分析每張圖的細胞覆蓋劃痕區的面積。
（三）實驗結果
如圖所示，ML表示MCF-7 細胞系。腫瘤分離細胞團分別由EGF、bFGF、NGF和proNGF處理，由t-EGF/bFGF、t-NGF、t-proNGF表示。可以看到由NGF處理的細胞，在4h的時候覆蓋面積*大，遷移速率*快。
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